HIV療失敗的核心挑戰(zhàn)在于耐藥突變（DRMs）的早期監(jiān)測。傳統(tǒng)Sanger測序對低頻突變（<20%）檢測靈敏度不足，而二代測序（NGS）雖可檢測低頻變異(1-5%)，但由于普通PCR（bulk PCR）擴增步驟，在擴增過程中可能引入偏好性偏差導致低頻突變比例被低估。北京地壇醫(yī)院團隊通過創(chuàng)新性應用數(shù)字PCR擴增（新羿數(shù)字PCR平臺）聯(lián)合NGS測序，將低頻耐藥突變的檢測靈敏度提升至1%以下，且通過單分子擴增有效降低了普通PCR的擴增偏好性，為臨床提供了更精準的耐藥監(jiān)測方案。

研究方法

2023-2024年北京地壇醫(yī)院106例ART治療失敗的HIV感染者（病毒載量≥50 copies/mL），按病毒載量分層（<1000、1000-9999、>10000 copies/mL）。

※ 技術對比

- 新羿dPCR vs 普通PCR：同步擴增HIV-1 pol基因（PR/RT/IN區(qū)），比較擴增效率；后續(xù)進行Sanger測序和NGS測序，分析低頻突變檢出差異。

- 關鍵改進：dPCR通過微滴分割（單分子擴增）減少擴增偏差，提升低頻突變富集能力。

關鍵結果

※ 技術性能

- 擴增成功率：dPCR整體達97.2%（PR/RT區(qū)）和93.4%（IN區(qū)），與普通PCR無顯著差異（P>0.05）。

- 一致性驗證：99%（102/103）樣本的兩種方法擴增序列聚類一致，證實dPCR結果可靠性。

※ 耐藥突變檢出

- Sanger測序：50.5%（52/103）樣本檢出耐藥突變，NNRTIs耐藥率最高（37.9%，如K103N、V106M）。

- NGS低頻突變：普通PCR擴增聯(lián)合NGS僅檢出31個突變，dPCR擴增聯(lián)合NGS檢出39個突變（+25.8%），包括與當前治療相關的Y181C、M184V等關鍵位點。

臨床意義

治療失敗預警：低頻突變≥1%時，NNRTIs方案失敗風險增加（5例繼續(xù)使用TDF+3TC+EFV均失敗）；≥2%突變可能發(fā)展為優(yōu)勢毒株如患者1684的M184V突變在病毒反彈時被確認）。。

方案優(yōu)化：檢出低頻NRTIs突變（如K65R）后，換用INSTIs/PIs方案（如DTG+3TC）可提高治療成功率（9/15例病毒抑制）。

臨床啟示

※ 檢測策略

對治療失敗患者，推薦dPCR擴增聯(lián)合NGS，以捕獲低頻耐藥突變。

※ 臨床應用價值

- 優(yōu)化治療方案：dPCR擴增與NGS聯(lián)合檢測可發(fā)現(xiàn)sanger測序遺漏的低頻耐藥突變，指導臨床優(yōu)先選擇耐藥屏障更多的藥物（如INSTIs）或增效PI方案，提升治療成功率。

- 精準耐藥監(jiān)測：對治療失敗患者（尤其是病毒載量較低或懷疑存在低頻突變的病例）常規(guī)進行dPCR擴增與NGS聯(lián)合檢測，進行精準的耐藥監(jiān)測。

總結與討論

※ dPCR獨立檢測HIV-1耐藥的優(yōu)勢

- 超高靈敏度，精準捕獲低頻突變：通過微滴單分子擴增技術，消除引物競爭偏倚，可檢測<1%的低頻耐藥突變。

- 低病毒載量樣本仍保持優(yōu)異性能：基于微滴分區(qū)擴增技術，有效降低優(yōu)勢模板競爭，確保稀有耐藥突變信號不被淹沒。對低病毒載量樣本仍保持優(yōu)異性能。

- 絕對定量，結果更可靠：無需標準曲線，直接輸出耐藥突變絕對比例，助力臨床決策。

※ dPCR獨立檢測的可行性

- 多重檢測能力：單管反應可同步檢測HIV-1核心耐藥位點（如K65R、M184V、K103N等），實現(xiàn)高效全面的耐藥分析。

- 無需NGS輔助：超高靈敏度結合特異性探針，直接對關鍵位點定量，省去復雜測序流程。

- 快速經(jīng)濟：3小時內完成檢測，成本遠低于NGS，更適合臨床常規(guī)開展。

 未來已來：dPCR引領HIV-1耐藥檢測新標準

數(shù)字PCR不僅是擴增技術的突破，更具備全流程解決方案的潛力。隨著耐藥Panel的優(yōu)化，dPCR有望成為HIV-1耐藥篩查的首選方案，讓精準醫(yī)療更高效、更可及！

如果您希望了解dPCR在HIV-1耐藥檢測中的完整應用方案，或獲取定制化服務，請聯(lián)系我們！

●關于新羿生物●