發(fā)表文獻網(wǎng)址：https://pubs.acs.org/doi/pdf/10.1021/acs.analchem.8b01096

近日，清華大學醫(yī)學院生物醫(yī)學工程系郭永實驗室合作在《Analytical Chemistry》發(fā)表題為”Noninvasive and Accurate Detection of Hereditary Hearing Loss Mutations with Buccal Swab Based on Droplet Digital PCR”的研究論文，該研究以數(shù)字PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，以口腔拭子為檢材，建立了一種精準可靠、靈敏度高、適合在人群中開展耳聾基因突變無創(chuàng)檢測的新方法。

耳聾是一種常見的遺傳病，遺傳異質(zhì)性高、人群攜帶率高，診斷價值大，普篩需求大。中國遺傳性耳聾的突變基因攜帶率約4-5%，發(fā)病率約為1-3/1000，每年大約新增6萬聾兒。目前耳聾突變檢測方法有基因芯片、質(zhì)譜、基因測序等技術(shù)，檢測樣本來源主要是成人靜脈血、新生兒足跟血，需要針刺取樣，屬于侵入性取樣方式?；谏鲜黾夹g(shù)開發(fā)的遺傳性耳聾無創(chuàng)檢測方法較少報道。

數(shù)字PCR作為一種新興并快速發(fā)展的檢測技術(shù)，具有單分子檢測靈敏度和絕對定量的能力，在生物、醫(yī)學、農(nóng)業(yè)和檢驗檢疫領(lǐng)域引起廣泛關(guān)注。本研究基于數(shù)字PCR的高靈敏度和絕對定量的優(yōu)勢，以口腔拭子為檢測樣本，建立了一種耳聾無創(chuàng)檢測新方法。該研究對耳聾8個常見突變位點檢測的特異性、動態(tài)范圍、最低檢測限等重要參數(shù)進行了系統(tǒng)驗證，通過無創(chuàng)取樣的口腔拭子對方法的準確性和臨床適用性進行了研究，見圖1。研究顯示，該方法特異性為100%，最低檢測限為5拷貝，在10-105拷貝范圍內(nèi)定量的準確性和重復性較好，并實現(xiàn)了對藥物性耳聾低至1%的突變異質(zhì)率精準定量檢測，所有臨床樣本檢測結(jié)果與Sanger測序一致率為100%。

圖1.耳聾基因突變無創(chuàng)檢測方法示意圖

該研究對口腔拭子在不同保存條件下的有效期進行了研究，結(jié)果顯示口腔拭子無論是在常溫還是-20℃保存，經(jīng)過長達90天的保存仍能被數(shù)字PCR技術(shù)準確檢出，這為口腔拭子在常溫運輸和保存后進行檢測提供了科學基礎(chǔ)?；跀?shù)字PCR對口腔拭子樣本進行檢測，樣本易得，靈敏度高，準確可靠，具有良好的臨床適用性和規(guī)?；Y查應用潛力。

已畢業(yè)博士生王芳為本文第一作者，郭永研究員對該研究進行了合作指導，這項研究得到了解放軍總醫(yī)院、博奧生物集團有限公司和北京新羿生物科技有限公司的大力支持。本課題得到國家自然科學基金委、中央公益性科研機構(gòu)基金、企業(yè)橫向合作課題等的經(jīng)費資助。

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https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.8b01096 

來源：清華新聞網(wǎng)