不平衡轉(zhuǎn)錄分析策略

上海長海醫(yī)院朱明華教授：作為病理人最根本的出發(fā)點在于為患者提供最精準(zhǔn)、全面、明確的檢測結(jié)果，讓患者獲益最大化。分子病理技術(shù)在病理診斷學(xué)科發(fā)展中的作用不可取代，臨床需求也越來越多，越來越迫切。相較于傳統(tǒng)定量PCR（qPCR），數(shù)字PCR最大的優(yōu)勢在于絕對定量和高靈敏特性，可助力分子病理精準(zhǔn)診斷，在精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用前景。 

曾瑄教授：前期我們進(jìn)行了大量探索性工作，發(fā)現(xiàn)很少有人對ALK融合陰性標(biāo)本做更多研究。所以我們針對肺癌ALK陰性標(biāo)本，采用數(shù)字PCR平臺作為方法學(xué)之一，發(fā)現(xiàn)假陰性病例，提示我們需要結(jié)合其他平臺來解決真實世界過程中檢測所遇到的這些問題?；跀?shù)字PCR進(jìn)行不平衡轉(zhuǎn)錄分析策略，通過檢測RNA的大量擴增，提示在酪氨酸激酶區(qū)域存在過度活化的生物學(xué)事件，相較于DNA檢測，能更貼近功能檢測。同時，前期大量研究也證實在RNA水平檢測融合基因會更具優(yōu)勢。到目前為止，利用數(shù)字PCR檢測ALK融合基因還未出現(xiàn)過假陰性或假陽性情況，所以我們看到了這個方法的應(yīng)用潛力。

另外，我們利用大量樣本驗證數(shù)字PCR的不平衡檢測策略能否用于甲狀腺癌RET融合檢測，通過數(shù)據(jù)顯示是可行的。為了進(jìn)一步驗證能否廣泛應(yīng)用于NTRK等泛癌腫融合檢測，我們也得到一些小樣本量的驗證。這種巧妙策略既能定量，同時又靈敏、簡便、快速，這無疑成為我們高度關(guān)注的平臺。

曾瑄教授：我們在前期研究中，發(fā)現(xiàn)數(shù)字PCR有以下優(yōu)勢。

絕對定量：通過我們的2項研究顯示出數(shù)字PCR絕對定量的優(yōu)勢；

不平衡法設(shè)計巧妙：通過3`端和IC之間的定量差異即可篩查是否融合，不受限于融合伴侶，可以將未知融合基因全部篩查；

對RNA樣本容忍度高：以RNA為對象檢測融合基因更具優(yōu)勢，同時數(shù)字PCR對RNA樣本的質(zhì)量忍耐度高，對RNA完整性不做要求。

靈敏度高：我們利用數(shù)字PCR檢測ALK等融合基因、EGFR等突變，至今未發(fā)現(xiàn)假陽性情況，防污染體系做的很棒；

成本可控：新羿生物全自主研發(fā)平臺，價格方面可調(diào)控，普及性會更好；

可持續(xù)的研發(fā)轉(zhuǎn)化能力：數(shù)字PCR平臺可根據(jù)客戶需求定制化的開發(fā)設(shè)計新產(chǎn)品，在科研上、臨床上都有很大的應(yīng)用前景。