發(fā)布日期:2018-09-20
發(fā)表文獻(xiàn)網(wǎng)址:https://pubs.acs.org/doi/pdf/10.1021/acs.analchem.8b01096
近日,清華大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程系郭永實(shí)驗(yàn)室合作在《Analytical Chemistry》發(fā)表題為”Noninvasive and Accurate Detection of Hereditary Hearing Loss Mutations with Buccal Swab Based on Droplet Digital PCR”的研究論文,該研究以數(shù)字PCR技術(shù)為基礎(chǔ),以口腔拭子為檢材,建立了一種精準(zhǔn)可靠、靈敏度高、適合在人群中開(kāi)展耳聾基因突變無(wú)創(chuàng)檢測(cè)的新方法。
耳聾是一種常見(jiàn)的遺傳病,遺傳異質(zhì)性高、人群攜帶率高,診斷價(jià)值大,普篩需求大。中國(guó)遺傳性耳聾的突變基因攜帶率約4-5%,發(fā)病率約為1-3/1000,每年大約新增6萬(wàn)聾兒。目前耳聾突變檢測(cè)方法有基因芯片、質(zhì)譜、基因測(cè)序等技術(shù),檢測(cè)樣本來(lái)源主要是成人靜脈血、新生兒足跟血,需要針刺取樣,屬于侵入性取樣方式?;谏鲜黾夹g(shù)開(kāi)發(fā)的遺傳性耳聾無(wú)創(chuàng)檢測(cè)方法較少報(bào)道。
數(shù)字PCR作為一種新興并快速發(fā)展的檢測(cè)技術(shù),具有單分子檢測(cè)靈敏度和絕對(duì)定量的能力,在生物、醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)和檢驗(yàn)檢疫領(lǐng)域引起廣泛關(guān)注。本研究基于數(shù)字PCR的高靈敏度和絕對(duì)定量的優(yōu)勢(shì),以口腔拭子為檢測(cè)樣本,建立了一種耳聾無(wú)創(chuàng)檢測(cè)新方法。該研究對(duì)耳聾8個(gè)常見(jiàn)突變位點(diǎn)檢測(cè)的特異性、動(dòng)態(tài)范圍、最低檢測(cè)限等重要參數(shù)進(jìn)行了系統(tǒng)驗(yàn)證,通過(guò)無(wú)創(chuàng)取樣的口腔拭子對(duì)方法的準(zhǔn)確性和臨床適用性進(jìn)行了研究,見(jiàn)圖1。研究顯示,該方法特異性為100%,最低檢測(cè)限為5拷貝,在10-105拷貝范圍內(nèi)定量的準(zhǔn)確性和重復(fù)性較好,并實(shí)現(xiàn)了對(duì)藥物性耳聾低至1%的突變異質(zhì)率精準(zhǔn)定量檢測(cè),所有臨床樣本檢測(cè)結(jié)果與Sanger測(cè)序一致率為100%。
圖1.耳聾基因突變無(wú)創(chuàng)檢測(cè)方法示意圖
該研究對(duì)口腔拭子在不同保存條件下的有效期進(jìn)行了研究,結(jié)果顯示口腔拭子無(wú)論是在常溫還是-20℃保存,經(jīng)過(guò)長(zhǎng)達(dá)90天的保存仍能被數(shù)字PCR技術(shù)準(zhǔn)確檢出,這為口腔拭子在常溫運(yùn)輸和保存后進(jìn)行檢測(cè)提供了科學(xué)基礎(chǔ)。基于數(shù)字PCR對(duì)口腔拭子樣本進(jìn)行檢測(cè),樣本易得,靈敏度高,準(zhǔn)確可靠,具有良好的臨床適用性和規(guī)?;Y查應(yīng)用潛力。
已畢業(yè)博士生王芳為本文第一作者,郭永研究員對(duì)該研究進(jìn)行了合作指導(dǎo),這項(xiàng)研究得到了解放軍總醫(yī)院、博奧生物集團(tuán)有限公司和北京新羿生物科技有限公司的大力支持。本課題得到國(guó)家自然科學(xué)基金委、中央公益性科研機(jī)構(gòu)基金、企業(yè)橫向合作課題等的經(jīng)費(fèi)資助。
論文鏈接:
https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.8b01096
來(lái)源:清華新聞網(wǎng)
京公網(wǎng)安備 11010802028168號(hào)