摘要

近日，西安市疾病預(yù)防控制中心馬超鋒團(tuán)隊(duì)和清華大學(xué)醫(yī)學(xué)院郭永團(tuán)隊(duì)合作，使用新羿生物的TD-1微液滴數(shù)字PCR系統(tǒng)精確定量新冠病毒N基因和ORF 1ab基因，比較了TRIzol 試劑、不同溫度的熱滅活方法對(duì)臨床樣本中新型冠狀病毒基因拷貝數(shù)的影響，為實(shí)驗(yàn)室選擇適宜滅活方法且提高檢出率提供了科學(xué)依據(jù)。該研究結(jié)果于5月28日在Journal of Clinical Microbiology 發(fā)表（doi:10.1128/JCM.00958-20）。

研究背景

新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）目前在全世界多個(gè)國(guó)家爆發(fā)流行，新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）核酸檢測(cè)目前是實(shí)驗(yàn)室病原檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。為保護(hù)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員不受感染，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用滅活標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測(cè)。其中常用的滅活方法是56℃水浴中加熱30分鐘，關(guān)于該方法對(duì)新冠病毒的RNA量是否有影響，進(jìn)一步，是否會(huì)影響弱陽(yáng)性標(biāo)本的檢出率，是新冠病毒診斷領(lǐng)域非常值得研究的問(wèn)題。

方法與結(jié)果

該研究收集了61份新型冠狀病毒核酸檢測(cè)陽(yáng)性的鼻咽拭子標(biāo)本，采用了以下幾種滅活方法：1、TRIzol試劑在室溫下滅活10分鐘；2、在56℃水浴中加熱30分鐘；3、高溫處理，包括121℃高壓20分鐘、100℃沸水浴煮沸20分鐘、80℃水浴加熱20分鐘。該研究發(fā)現(xiàn)，與原始樣品中的RNA量相比，TRIzol處理破壞了47.54%的N基因和39.85%的ORF 1ab基因；56℃30分鐘加熱處理后，N基因和ORF 1ab拷貝數(shù)分別減少48.55%和56.40%；在80℃加熱20分鐘后，病毒RNA拷貝數(shù)下降了50-66%；121℃高壓滅菌或100℃煮沸20分鐘破壞了絕大部分病毒RNA，幾乎未檢測(cè)到病毒RNA。

圖1. TRIzol室溫10分鐘處理對(duì)生物標(biāo)本中新冠病毒基因拷貝數(shù)的影響

圖2. 56℃加熱30分鐘處理對(duì)生物標(biāo)本中新冠病毒基因拷貝數(shù)的影響

圖3. 80℃、100℃及121℃加熱20分鐘處理對(duì)生物標(biāo)本中新冠病毒基因拷貝數(shù)的影響

研究結(jié)論

該研究結(jié)果表明，滅活降低了可檢測(cè)到的病毒RNA數(shù)量，尤其對(duì)于弱陽(yáng)性標(biāo)本，可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。相較于熱滅活，TRIzol處理對(duì)病毒核酸拷貝數(shù)影響更小，因此推薦使用TRIzol對(duì)臨床樣本進(jìn)行滅活處理。

作者介紹 

吳瑞、陳海龍、邢遠(yuǎn)為該研究的共同第一作者，馬超鋒和郭永為該研究的共同通訊作者。

參考資料：

Influence of Different Inactivation Methods on Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 RNA Copy Number

https://jcm.asm.org/content/early/2020/05/28/JCM.00958-20